內(nèi)容大綱
什么是微生物檢測(cè)?
飲用與包裝水的水質(zhì)規(guī)范
常見水中微生物檢測(cè)方法 
水中微生物檢測(cè)流程 
挑選微生物檢測(cè)設(shè)備的兩大重點(diǎn)

 

什么是微生物檢測(cè)? 

微生物 (microorganism) 普遍存在于自然環(huán)境中，它們已被廣泛應(yīng)用于食品制造業(yè)，如保健食品、奶酪、啤酒、面包等。然而，某些微生物的存在會(huì)造成人體的不適或?qū)】翟斐晌：?，常見的病原菌如大腸桿菌 (E. Coli)、沙門氏菌 (Salmonella)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 等。

因此微生物的檢測(cè)可確認(rèn)樣品中特定微生物的存在狀況與數(shù)量，或可監(jiān)測(cè)環(huán)境及產(chǎn)品是否受到污染及受污染的程度，是制藥、食品、飲料、化妝品等行業(yè)中重要的質(zhì)量管控項(xiàng)目 (quality control)，以確保最終產(chǎn)品的安全。

 

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飲用水與包裝水的水質(zhì)規(guī)范 

水是自然界重要的生物資源之一，生物皆賴以為生，而致病性微生物的接觸、攝入是其主要風(fēng)險(xiǎn)之一。為維護(hù)生態(tài)環(huán)境及保障用水的安全，微生物含量的監(jiān)測(cè)不可或缺，是評(píng)估衛(wèi)生、質(zhì)量的常用指標(biāo)。
我國(guó)對(duì)于微生物的規(guī)范，除了河川、湖泊、海域等環(huán)境的地面水體外，也訂定飲用水、包裝及盛裝飲用水等相關(guān)規(guī)范。

依我國(guó)行政院環(huán)保署及衛(wèi)生福利部公告水質(zhì)微生物標(biāo)準(zhǔn)整理如下。其中針對(duì)市售包裝/盛裝飲用水，除了在水源、水質(zhì)須符合飲用水水源及水質(zhì)相關(guān)規(guī)范外，水體經(jīng)處理后也應(yīng)符合我國(guó)衛(wèi)生福利部公告之食品中微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

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常見水中微生物檢測(cè)方法

水中微生物的檢測(cè)有多種方法，常見的有多管發(fā)酵法 (multiple-tube fermentation method or MPN method)、涂抺法 (spread plate method)、混合稀釋法 (pour plate method) 及濾膜法 (membrane filter method)。

濾膜法是一種廣為使用的分離技術(shù)，已于1961年被美國(guó)環(huán)保局 (U.S. EPA) 采用。與其它方法相比，濾膜法的優(yōu)勢(shì)包含：前置準(zhǔn)備工作少、樣品具高度代表性、可降低偽陽(yáng)(陰)性機(jī)率、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等，是水質(zhì)、液態(tài)樣品中微生物的主要分離技術(shù)。

 

	濾膜法
前置作業(yè)	制備 agar plate
培養(yǎng)時(shí)程	24 ± 2 小時(shí)
耗材	濾膜、培養(yǎng)皿
樣品處理量	大
適用熱敏感物質(zhì)	是
適用樣品狀態(tài)	低濁度之一般水樣
準(zhǔn)確度	高
結(jié)果判定	直接觀察計(jì)數(shù)菌落 (colony) 數(shù)量
菌株分離	是
其它	?濾膜可直接轉(zhuǎn)移至不同培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn) ?可有效移除水樣中抗菌化學(xué)物質(zhì)

濾膜法是將液態(tài)檢體經(jīng)一定孔徑的濾膜過(guò)濾后，將大于其孔徑的微生物滯留于濾膜上，于適當(dāng)培養(yǎng)基及環(huán)境下進(jìn)行微生物培養(yǎng)，最后透過(guò)觀察、計(jì)數(shù)得到樣品中微生物的數(shù)量。 

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水中微生物檢測(cè)流程 

微生物檢測(cè)流程以「飲用水中大腸桿菌群檢測(cè)方法－濾膜法 (NIEA E230.55B)」 為例：

· 實(shí)驗(yàn)應(yīng)全程于無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行。

· 前置作業(yè)：將過(guò)濾裝置(filtration apparatus)中的不銹鋼濾杯(funnel)及浸泡過(guò) 95 % 酒精的鑷子以 電子點(diǎn)火式本生燈進(jìn)行火焰滅菌，冷卻至室溫備用。

洛科電子點(diǎn)火式本生燈均通過(guò)歐盟CE安全認(rèn)證，快速點(diǎn)火，焰力穩(wěn)定，溫度最高可達(dá) 1300℃

Dragon100火炬式
Dragon200桌上型
Dragon220桌上型（45度傾斜）

檢測(cè)步驟：

1. 將無(wú)菌濾膜 (sterile membrane filter) 放置于濾杯基座上，加入少量無(wú)菌稀釋液，以測(cè)定過(guò)濾裝置是否裝置妥當(dāng)。

2. 檢測(cè)或稀釋前，劇烈搖晃 25 次以上，以充分混合樣品。

3. 加入 100 mL 水樣以真空幫浦 (vacuum pump) 過(guò)濾，再以 20 mL 以上之無(wú)菌稀釋液沖洗濾杯。

4. 移開濾杯，取出過(guò)濾后之濾膜放置于含有培養(yǎng)基之培養(yǎng)皿上。濾膜應(yīng)完全與培養(yǎng)基貼合，避免產(chǎn)生氣泡。

5. 將培養(yǎng)基倒置于培養(yǎng)箱 (incubator) 內(nèi)，以 35 ± 1 oC 培養(yǎng) 24 ±2 小時(shí)。 培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)基，以 Galaxy 330 菌落計(jì)數(shù)器 (colony counter) 計(jì)數(shù)并記錄培養(yǎng)皿中金屬光澤菌落數(shù)。若菌落太多造成計(jì)困難時(shí)，則以「菌落太多無(wú)法計(jì)數(shù)」(Too numerous to count; TNTC) 表示。

6. 結(jié)果處理：以公式計(jì)算大腸桿菌群密度，單位為 CFU/100 mL (Colony forming units/100 mL)。

 

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挑選微生物檢測(cè)設(shè)備的兩大重點(diǎn)

水中微生物檢測(cè)是將水樣過(guò)濾后，再將濾膜放置培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察微生物生長(zhǎng)的情形。檢測(cè)過(guò)程中常有多重復(fù)樣品需求，且常需倒除大量廢液。在采購(gòu)相關(guān)設(shè)備時(shí)，可考慮以下兩大重點(diǎn)：

 

1) 選擇可以快速滅菌的設(shè)備
實(shí)驗(yàn)設(shè)備常以高壓滅菌釜 (autoclave) 進(jìn)行滅菌，動(dòng)輒需花費(fèi)數(shù)小時(shí)。為了加速實(shí)驗(yàn)流程，除了可以準(zhǔn)備多組設(shè)備方便交替使用以外，也可考慮使用能夠快速滅菌的材質(zhì)，例如以不銹鋼制成的設(shè)備，可以直接以火焰滅菌，只需數(shù)秒時(shí)間加熱并冷卻后，就能立即檢測(cè)樣品。不僅大幅縮短樣品處理時(shí)間，也讓流程更順暢。

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2) 方便排除廢液。
微生物檢測(cè)所過(guò)濾的水樣，不需特殊處理即可直接倒除，然而，如果過(guò)濾的水樣還要用廢液瓶搜集后再倒掉，等于多花一次功夫。
如果選用具有直接排水設(shè)計(jì)的設(shè)備，就可以將過(guò)濾后的廢水直接引導(dǎo)至水槽，省去倒除廢液的步驟、節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

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